ПЦР диагностика гепатита С | Медицинский онлайн гид
Диагностика 

ПЦР диагностика гепатита С

admin

Для HCV-инфекции (гепатита С) характерно длительное бессимптомное течение. Поэтому заболевание выявляется уже на стадии хронического процесса или цирроза печени. ПЦР на гепатит С позволяет диагностировать патологию на ранней стадии, своевременно назначить адекватное лечение и избежать ее прогрессирования.

Содержание

Показания к проведению лабораторного теста

Исследование с помощью полимеразной цепной реакции требует сложного оборудования и специально обученного персонала, что обуславливает его высокую стоимость. Поэтому при подозрении на наличие вируса нсv пациента вначале направляют сдать иммуноферментный анализ. Если ИФА – положительный и удалось обнаружить антитела к гепатиту, то человека отправляют сдавать ПЦР. Кроме того, обследованию с применением этой методики подлежат:

  • медицинские работники и косметологи, контактирующие с кровью больных гепатитом;
  • люди, часто вступающие в половые контакты с незнакомыми партнерами и практикующие незащищенный секс;
  • наркозависимые, вводящие наркотики инъекционно;
  • больные, которым часто делают инвазивные диагностические или терапевтические процедуры;
  • пациенты со СПИД, онкобольные;
  • люди после спонтанного контакта с открытой раневой поверхностью, кровью незнакомого человека или нестерильным медицинским инструментарием;
  • те, кому трансплантацию или гемотрансфузию проводили до 1992 г. (когда не было надежных методик для определения вируса в донорских материалах).

ПЦР диагностика гепатита является обязательной в I и III периодах гестации. Часто обнаруживается сочетание ВИЧ и гепатита С, поэтому больным, входящим в группу риска, назначают оба вида анализа.

Также тестирование показано новорожденным, если мать заражена вирусным гепатитом. Перед некоторыми операциями пациентам делают иммуноферментный анализ, а при необходимости – ПЦР. При выявлении в биохимическом анализе крови повышенного уровня внутриклеточных ферментов АлАТ (аланин-аминотрансферазы) и АсАТ (аспартат-аминотрансферазы) показано проведение ПЦР-исследования.

Показанием к углубленному исследованию являются симптомы, позволяющие предположить желтуху. В преджелтушном периоде у больных проявляются следующие признаки:

  • астеновегетативный синдром: слабость, быстрая утомляемость;
  • диспепсические расстройства: тошнота, рвота, дискомфорт в правом подреберье;
  • снижение аппетита;
  • артралгический синдром – эпизодические боли в суставах;
  • кожный зуд.

В желтушном периоде кроме перечисленных выше появляются другие симптомы:

  • головная боль;
  • головокружение;
  • увеличенная печень и селезенка;
  • сосудистые звездочки;
  • покраснение ладоней и стоп (иногда).

Если проявляются 1 или несколько симптомов, то незамедлительно следует обращаться при гепатите к врачу для назначения обследования.

Как сдавать анализ

Для исследования при гепатите С берут биоматериал, в котором можно обнаружить ДНК или РНК инфекционного агента. Для получения объективного результата пациенту необходимо соблюдать правила подготовки к забору крови.

Подготовка к обследованию

Чтобы не исказить результаты анализа ПЦР на гепатит С, необходимо:

  • соблюдать диету №5 в течение 2 суток до анализа – не употреблять жирные, жареные, пряные, маринованные блюда;
  • за 2 дня отказаться от кофе, сладких газированных напитков, алкоголя и соков;
  • за сутки прекратить прием лекарств, а если они жизненно необходимы, нужно уведомить специалиста о терапии и виде препаратов;
  • за 8 часов прекратить прием пищи;
  • избегать высоких физических нагрузок, волнений, стресса.

Нельзя проводить исследование сразу после физиопроцедур, массажа, лучевых методов диагностики.

Правила забора материала

Кровь для анализа берут из локтевой вены с помощью одноразовой иглы диаметром 0,8-1,1 мм утром на голодный желудок. Образец в объеме не менее 5 мл помещают в одноразовую вакуумную пробирку типа Vacuette® с маркировкой «ЭДТА-К3». Емкость имеет герметичную пробку сиреневого цвета, которую нельзя открывать. Сразу после помещения крови в пробирку ее переворачивают (2-4 раза), чтобы перемешать материал с консервантом.

Хранить собранный материал разрешено не более 3 часов при +2…+8°С. Транспортируют образцы в специальном контейнере с хладоэлементом.

Разновидности исследования

Метод ПЦР имеет несколько разновидностей, которые назначают в зависимости от поставленной цели.

Качественно тестирование

Качественный ПЦР на гепатит С показывает наличие или отсутствие РНК ВГС в пробах. Его назначают всем пациентам, у кого предварительный анализ (ИФА) выявляет наличие антител к вирусу гепатита. Чувствительность тест-систем, используемых для проведения анализа, варьируется в пределах 10-500 МЕ/мл. Анализ используют и для мониторинга эффективности противовирусного лечения.

ПЦР на гепатит С (качественный анализ) не совсем точен, т. к. отрицательный результат не означает, что в организме отсутствует вирус. Возможно, его количество ниже порога восприимчивости тест-системы. Поэтому у пациентов с низкой концентрацией вируса, например, у тех, кто проходит терапию, необходимо учитывать диагностическую чувствительность теста и использовать соответствующий.

Количественная реакция

Количественный анализ используется для определения вирусной нагрузки – количества РНК вируса в объеме крови. Данный метод позволяет подтвердить диагноз, но не дает возможности выявить тяжесть патологии.

Преимущество количественного исследования в том, что с его помощью определяется контагиозность заболевания – чем выше концентрация патогена, тем выше риск заражения. Кроме того, концентрация патогенных микроорганизмов влияет на качество терапии – при низкой нагрузке вероятность благоприятного исхода выше, чем при высокой.

Порог чувствительности диагностического теста для количественного анализа ПЦР выше, чем качественного.

Генотипирование

Вирус гепатита С имеет несколько штаммов (7 генотипов и 67 субтипов). Метод генотипирования позволяет установить разновидность обнаруженного вируса. Точное выявление генотипа повышает эффективность лечения, что имеет большое значение, учитывая множество побочных явлений и низкую переносимость антивирусных препаратов.

У большинства пациентов заболевание вызывают сразу несколько типов вирусов. Например, генотип HCV1b в 90% случаев вызывает хроническое течение гепатита, а 2 и 3а – в 33-50%. Внедрение патогена с генотипом:

  • 1b вызывает более тяжелое течение болезни, сопровождается циррозом или раком печени, обширным фиброзом;
  • 3а сопровождается интенсивным стеатозом, поражением желчевыводящих путей, повышенным уровнем АлАТ.

Соответственно, с выявленным штаммом необходимо выбрать стратегию терапии. Поэтому преимуществом генотипирования является возможность:

  • выбора более точной и качественной тактики терапии;
  • оценки эффективности лечения;
  • прогнозирования течения заболевания и хронизации процесса;
  • определения рисков осложнений.

Результаты исследований специалист заносит в таблицу бланка. Ее расшифровкой занимается врач, т. к. простое сравнение с нормой не всегда может отражать объективное положение. Необходимо анализировать полученные показатели в комплексе с результатами, полученными при биохимическом анализе крови, биопсии и УЗИ.

Расшифровка результатов

Чтобы расшифровать анализы, нужно учитывать разновидность исследований и референсные значения. Например, при проведении качественного анализа результат может быть следующий:

  • «обнаружено» – подтверждено наличие инфекционного агента и заболевания;
  • «не обнаружено» – болезнь не подтверждена, не обнаружен вирус из-за его отсутствия или неправильно подобранной тестовой системы.

Расшифровать количественный анализ поможет сравнение с нормой:

  • «не обнаружено» – HCV отсутствует, что может значить, что обследуемый здоров, или количество РНК в образце ниже, чем чувствительность теста;
  • ˂1,8х10^2 МЕ/мл – результат ниже порога количественного определения – требуется повторное исследование и назначение дополнительных анализов;
  • ˂8х10^5 МЕ/мл – низкая HCV-нагрузка свидетельствует о действенности терапии;
  • ˃8х10^5 МЕ/мл – высокая концентрация – необходима коррекция плана терапии;
  • ˃2,4х10^7 МЕ/мл – слишком высокая концентрация вирусного РНК (выше порога количественного определения) требует повтора исследования и разведения анализируемого материала.

Результаты генотипирования могут быть отражены следующим образом:

  • «обнаружено» – нашли вирус отдельного генотипа, при этом в таблице указывают генотип и субтип обнаруженных возбудителей;
  • «обнаружено» – выявлен штамм вируса, который не относится к группе самых распространенных, поэтому необходимо углубленное исследование для уточнения генотипа;
  • «не обнаружено» – пациент здоров, или количество HCV в образце слишком мало.

Качество анализа зависит от правильного выбора тест-систем, квалификации персонала и правильности отбора или транспортировки материала, чистоты образца.

Сколько делается анализ ПЦР на гепатит

Для обработки данных анализа на РНК HCV требуется около 2 недель, или 14 рабочих дней. В частных диагностических центрах срок может быть сокращен на несколько дней.

Какие результаты бывают

В некоторых случаях кроме перечисленных выше могут отмечаться ложноположительные или ложноотрицательные показатели. Поэтому рекомендуется подтвердить их точность с помощью других диагностических методик или повторить тестирование через некоторое время.

Что значит, если ПЦР на гепатит с отрицательный, а антитела – есть

Вариантом ложноотрицательного ответа может быть такой: результат ПЦР – «не обнаружено», а результат ИФА – «положительный». Это может значить, что больной недавно перенес обострение хронической формы желтухи, и в крови еще присутствуют антитела к HCV.

Где пройти обследование, и какова его стоимость

Пройти исследование на гепатит С можно как в государственных и ведомственных лабораториях, так и в частных диагностических центрах. В последних учреждениях диагностика стоит дороже, но результат можно получить раньше. В среднем стоимость количественного определения HCV методом ПЦР составляет 2900 руб.