Особенности проведения ПЦР-анализа на ЦМВ

С болезнями, вызванными вирусами семейства Herpesviridae, пациенты обращаются к врачам разных специализаций, например терапевту, урологу, венерологу. На сегодняшний день выявлено и изучено восемь антигенных серотипов герпесвирусной инфекции: простой герпес 1-го и 2-го типов, ветряной оспы и опоясывающего лишая, вирус Эпштейна-Барр, вирусы герпеса человека 5-го (цитомегаловирус), 6-го, 7-го и 8-го типов.

Цитомегаловирус (ЦМВ) принадлежит подсемейству бетагерпесвирусов. Обмен вирусами происходит воздушно-капельным, половым путём, во время родов, грудного кормления и при переливании крови. У заражённого человека развивается цитомегалия. Заболевание проявляется по-разному. По симптоматике оно может напоминать ОРВИ, при генерализованной форме инфекции поражаются внутренние органы. Часто страдают мочеполовая и мочевыводящая системы. Для лечения применяются противовирусные и общеукрепляющие препараты, при развитии осложнений – антибактериальные. Симптомокомплекс ЦМВ очень легко спутать с другими заболеваниями. Диагностируют его с помощью иммуноферментного анализа, посева на культуре клеток, цитологического исследования, теста по методу ПЦР. Именно о последнем методе пойдёт речь в этой статье.

Содержание

• 1 Что такое ПЦР-анализ на цитомегаловирус, и в каких случаях назначается
• 2 Подготовка и правила сдачи анализа
  • 2.1 Какие материалы берут для исследования
  • 2.2 Как осуществляется забор
  • 2.3 Нужна ли подготовка
  • 2.4 Как проводится исследование при беременности
• 3 Сроки готовности анализа
• 4 Расшифровка результата
• 5 Стоимость процедуры
• 6 Преимущества и недостатки процедуры

Что такое ПЦР-анализ на цитомегаловирус, и в каких случаях назначается

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – способ диагностики, при котором для исследования берётся биологический материал человека с целью найти там следы ДНК заданного образца. Метод основан на оказании воздействия на исходный материал, чтобы добиться увеличения концентрации фрагментов рибонуклеиновой кислоты в нём. Такое исследование могут использовать, чтобы установить степень родства разных людей или определить причастность к преступлению. Метод ПЦР применяют также для диагностики заболеваний наследственной либо инфекционной (вирусной, бактериальной, грибковой, паразитарной) этиологии, в том числе для выявления цитомегаловируса.

ПЦР-анализ на цитомегаловирус назначают в следующих случаях:

• планирование беременности;
• фетоплацентарная недостаточность (комплекс симптомов, свидетельствующих о патологиях плаценты и плода);
• скрининг ВИЧ-инфицированных пациентов;
• неопластические трансформации (связанные с перерождением клеток при развитии опухолей);
• приём цитостатиков (противоопухолевых препаратов, которые замедляют рост и развитие клеток организма);
• клиническая симптоматика инфекционного заболевания, но возбудитель не обнаружен;
• повышение температуры тела без установленной причины;
• атипичная пневмония;
• симптомы мононуклеоза;
• длительное безрезультатное лечение воспалительного процесса;
• проверка донорской крови;
• подготовка к трансплантации органа или ткани.

Анализ ПЦР на цитомегаловирус берут у новорождённых в возрасте до двух недель при наличии признаков врождённой инфекции: желтуха, анемия, несоответствие размера головы возрасту, увеличение селезёнки, печени, нарушение зрения, слуха, неврологические отклонения.

Анализ назначают женщинам при невынашивании беременности либо подозрении на инфицирование плода, если она наступила.

Подготовка и правила сдачи анализа

ПЦР – высокоточная, очень чувствительная методика. Для получения объективных результатов очень важно соблюдать регламент подготовки к исследованию и правила забора материала.

Какие материалы берут для исследования

В качестве биологического материала для ПЦР-теста на ЦМВ применяют:

• эпителий цервикального канала;
• мазок из урогенитального тракта;
• соскоб из конъюнктивы глаз;
• буккальный соскоб (из внутренней поверхности щеки);
• ротоглоточный соскоб.

Для оценки на предмет присутствия в организме цитомегаловируса подойдут и другие биологические жидкости: кровь, околоплодные воды, грудное молоко, спинномозговая жидкость, слюна, мокрота, моча, ликвор, биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки.

Как осуществляется забор

При заборе материала из влагалища и шейки матки используется маточное зеркало, а также тампон-зонд. Эта манипуляция проходит во время стандартного гинекологического осмотра.

Взятие биоматериала из мужского полового органа также производится мазком. Его берут при помощи стерильного ватного тампона, который вводится в уретру, а затем извлекается. Болевые ощущения при этой манипуляции отсутствуют, однако она может вызвать дискомфорт.

Сбор материала с конъюнктивы осуществляется затупленным офтальмологическим скальпелем.

Чтобы выполнить ротоглоточный соскоб, берут мазок из зева. Такой забор осуществляется при помощи ватной палочки, которой прикасаются к задней стенке глотки и миндалинам. Эта процедура не является болезненной, но может вызвать неприятные ощущения. По такой же схеме проводят буккальный соскоб.

Забор биоматериалов из желудка и двенадцатиперстной кишки производится методом биопсии (взятия кусочка ткани со стенок внутреннего органа при  фиброгастродуоденоскопии). Для этого инструмент спускается по трубке эндоскопа.

Забор крови на ЦМВ производится из локтевой вены при помощи одноразовой иглы. При сдаче мочи на исследование должно пройти не более трёх часов с момента мочеиспускания до доставки анализа в лабораторию.

Нужна ли подготовка

Общие правила подготовки к взятию мазка для анализа ПЦР на ЦМВ заключаются в следующем:

• отказ от приёма антибиотиков за 2 дня до проведения теста;
• отказ от курения в день забора биоматериала;
• исключение из рациона жирной пищи и запрет на спиртные напитки в течение двух суток;
• отказ от прохождения рентгеновского обследования, ректального осмотра и физиотерапии накануне.

Перед забором материала на анализ придётся воздержаться от приёма пищи минимум на 7 часов.

Если запланирован ПЦР-мазок на выявление ЦМВ из цервикального или урогенитального каналов, требуется воздержание от половой близости за 3 дня до проведения манипуляции.

Перед выполнением буккального или ротоглоточного соскобов нельзя чистить зубы и пить что-либо, даже воду. При сдаче мочи тоже запрещено питьё.

Как проводится исследование при беременности

При подозрении на инфицирование плода для забора биоматериала на цитомегаловирусную инфекцию применяются инвазивные методы. Так, на сроке с 16-й до 23-й неделю в качестве биологического материала используется амниотическая жидкость (жидкая среда, окружающая плод, – околоплодные воды), а на сроке с 20-й до 24-й недели можно осуществить оценку пуповинной крови.

Забор околоплодных вод (амниоцентез) осуществляется двумя способами – методом «свободной руки» и с применением пункционного адаптера.

При методе «свободной руки» взятие биоматериала контролируется УЗИ. В месте прокола не должно быть плаценты, или слой плаценты должен быть наиболее тонким.

При методе с пункционным адаптером ручка прибора крепится к аппарату УЗИ, затем прочерчивается траектория, по которой пройдёт игла. При проведении данной процедуры важен профессионализм врача. Сама процедура является довольно безопасной.

Амниоцентез длится примерно пять минут, с учётом времени на подготовку к анализу. Прокол занимает примерно одну минуту, затем осуществляется забор амниотической жидкости. После процедуры пациентка остаётся под наблюдением врачей в больнице в течение двух часов.

Проведение анализа по ощущениям напоминает обычный укол, а во время непосредственного забора околоплодных вод чувствуется небольшое давление внизу живота. В большинстве случаев обезболивание не требуется. Многие пациентки предпочитают обходиться без анестезии, поскольку проще перенести один укол, чем два. После амниоцентеза рекомендуется соблюдать постельный режим в течение суток.

Пациентке необходимо срочно обратиться за медицинской помощью к врачу или вызвать скорую, если после процедуры у неё наблюдаются следующие симптомы:

• тошнота, рвота;
• повышенная температура, лихорадка;
• боли, спазмы в нижней части живота;
• кровянистые выделения из влагалища;
• подтекание либо излитие околоплодных вод;
• покраснение, отёчность в месте, где выполнялся прокол;
• выделение из места прокола сукровицы (жидкости желтоватого цвета, которая вытекает вместе с кровью) или гноя.

Сроки готовности анализа

В некоторых лабораториях результаты исследования можно получить в день сдачи анализа либо на следующий день. Однако если сотрудники слишком загружены, либо из медицинского центра биоматериал направляют в другую лабораторию, придётся ждать заключение примерно 2-3 дня.

Расшифровка результата

Отрицательный результат говорит о том, что пациент не инфицирован. Такой итог возможен, если фрагменты ДНК цитомегаловирусной инфекции не были обнаружены.

Сомнительный результат бывает, если были нарушены правила сбора биологического материала – не хватило клеток для проведения анализа. Необходимо провести процедуру повторно.

Положительный результат свидетельствует о том, что в организме есть антигены цитомегаловируса. Это происходит в случае, если были обнаружены фрагменты ДНК ЦМВ, то есть пациент инфицирован.

Есть маленькая вероятность получения ложноположительного результата. Так происходит, если были нарушены правила сдачи анализа – в биоматериале обнаружены клетки, не характерные для организма.

При данном методе лабораторной диагностики учитываются наличие или отсутствие антител IgG и IgM.
Присутствие IgG свидетельствует о том, что пациент был заражён относительно давно, у него уже выработался иммунитет к возбудителю заболевания. Обострение инфекции возможно при ослаблении иммунитета. IgM положительный указывает на то, что пациент заразился недавно, и в его организме ещё нет иммуноглобулинов для защиты от заболевания.

В зависимости от целей диагностики, врач назначает качественный или количественный анализ. Последний необходим для подбора наиболее эффективной тактики лечения.

Стоимость процедуры

Цена исследования – от 400 до 1300 рублей, в зависимости от используемого биоматериала.

Преимущества и недостатки процедуры

Преимущества ПЦР-диагностики цитомегаловирусной инфекции:

• универсальность – для теста подходит практический любой вид биоматериала (из цервикального, урогенитательного каналов, слизистых глаз и ротовой полости, ротоглотки);
• подтверждение инфицирования до появления клинической симптоматики;
• вирус может быть обнаруженным даже при малой концентрации фрагментов нуклеиновой кислоты в образце;
• скорость получения результатов – от нескольких часов;
• высокая точность результатов при условии правильности подготовки к процедуре и забора материала.

К недостаткам процедуры можно отнести большую чувствительность теста к посторонним ДНК. Так, при загрязнении исходного образца возможен ложноположительный результат. Во избежание таких ошибок необходимо обращаться в проверенные медицинские центры и лаборатории.