Как сдается анализ ПЦР на ВИЧ-инфекцию

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) справедливо называют эпидемией 21-й века, поскольку ежедневно в мире заражается 7000 человек, и 5400 инфицированных умирает от осложнений этой инфекции. Каждый житель планеты имеет ВИЧ-статус: у кого-то он отрицательный, а у кого-то – положительный. Определение статуса относительно вируса иммунодефицита человека проводят с помощью количественных и качественных тестов. Наиболее точно наличие возбудителя в организме показывает ПЦР на ВИЧ.

Содержание

• 1 Как ПЦР работает при диагностике ВИЧ-инфекции
• 2 Кому и в каких случаях проводится диагностика
• 3 Как сдаётся анализ
  • 3.1 Подготовка пациента
  • 3.2 Взятие материала
• 4 Расшифровка результатов
  • 4.1 Сколько времени делается анализ
  • 4.2 Показатели качественного анализа
  • 4.3 Количественное исследование
  • 4.4 Генотипирование
  • 4.5 Может ли результат быть ложноположительным
  • 4.6 Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ
• 5 Стоимость исследования

Как ПЦР работает при диагностике ВИЧ-инфекции

Принцип действия полимеразной цепной реакции достаточно сложный. Это метод молекулярной генетики, позволяющий анализировать любую короткую последовательность ДНК или РНК. Это можно осуществлять даже в образцах биологического материала, содержащих минимальное количество искомых патогенных возбудителей. Более простым языком ПЦР при ВИЧ можно объяснить так:

• каждый вирус, в том числе и вирус иммунодефицита, содержит геном, закодированный в ДНК или РНК определенным набором нуклеотидов, которые образуют две параллельные спиралевидные цепи, соединённые между собой;
• в ходе многочисленных исследований учёным удалось выделить и воспроизвести участок РНК вируса иммунодефицита человека;
• во время проведения ПЦР происходит многоразовое копирование генома материала при температуре реагента 94 градуса Цельсия, после чего полученную РНК сравнивают с эталонной РНК вируса.

По окончании анализа амплификатор выдаёт результат – отрицательный, то есть геном вируса иммунодефицита в исследуемом материале отсутствует, или положительный, когда выявлена частица РНК вируса ВИЧ.

ПЦР является одновременно и качественным, и количественным анализом крови, поскольку определяет наличие вируса и его концентрацию, что важно для мониторинга антиретровирусной терапии.

Кому и в каких случаях проводится диагностика

Полимеразная цепная реакция не принадлежит к скрининговым методам диагностики болезни, а используется для подтверждения диагноза у лиц с подозрением на инфицирование. Тестирование показано в следующих ситуациях.

• Положительная или слабоположительная реакция анализа ИФА. Выявление антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа – это скрининговый метод диагностики ВИЧ, который проводят лицам из групп риска, а также всем желающим определить свой ВИЧ-статус. Все положительные и слабоположительные ИФА-тесты проходят повторную диагностику путём ПЦР.
• Неоднозначная интерпретация скрининговых тестов на ВИЧ. Для скрининга используют ИФА, после чего материал дообследуют методом иммуноблотинга. Ситуация, когда результаты этих тестов различаются, требует проведения ПЦР.
• Исследование крови от доноров с целью профилактики распространения ВИЧ. Гемоматериал проверяют одновременно методами ИФА и ПЦР, поскольку при недавнем заражении антитела к вирусу иммунодефицита могут ещё не сформироваться.
• Тестирование крови новорождённых от матерей, больных СПИДом. Поскольку у женщин с положительным ВИЧ-статусом в крови циркулируют антитела против возбудителя, то и у новорождённого также будут обнаруживаться эти иммуноглобулины. Тест ИФА будет положительным всегда, но это не будет говорить о том, что ребёнок инфицированный. Поэтому всем детям, которые были рождены от матерей, больных СПИДом, проводят ПЦР. Достоверность исследования составляет 99 %. Учитывая риск ложноотрицательного результата, первую ПЦР выполняют ребёнку в возрасте один месяц, а вторую – в четыре месяца. Но даже при двух отрицательных тестах на ВИЧ обязательно проводят ИФА в 12 месяцев, чтобы удостовериться в том, что иммуноглобулины матери исчезли из кровяного русла. Если ИФА в год положительная, то контрольное исследование делают через 6 месяцев.
• Острый период ВИЧ-инфекции. В этом периоде заболевание маскируется под ОРВИ и моноцитарную ангину, но симптомы беспокоят пациента на протяжении нескольких недель. Признаками, которые также должны насторожить, являются отсутствие ринита и лимфаденопатия нескольких групп лимфатических коллекторов. Симптомы появляются через 3-4 недели после заражения, и антитела к патогену ещё не успевают синтезироваться, поэтому используют метод ПЦР, чтобы идентифицировать РНК ВИЧ.
• Факт контакта медработника с биологическим материалом пациента с ВИЧ. В данном случае показана химиопрофилактика антиретровирусными препаратами, поэтому необходимо определить сразу после контакта, произошло ли инфицирование медработника или нет.
• Дифференциальная диагностика ВИЧ 1-го и 2-го типов. ВИЧ 1-го типа более агрессивен и быстрее распространяется, поэтому пациентам с положительным ВИЧ-статусом назначают тест ПЦР с целью идентификации типа возбудителя. Хотя у многих больных одновременно обнаруживают оба типа патогена.

Независимо от ситуации, ПЦР назначается врачом-инфекционистом. Также можно пройти тестирование в частной клинике по собственному желанию, причём анонимно.

Как сдаётся анализ

Для диагностики на ВИЧ/СПИД методом ПЦР используют венозную кровь. Тестирование проводят как в государственном учреждении, которое принято называть СПИД-центром, так и частных клиниках.

Если вы подозреваете, что могли заразиться вирусом иммунодефицита человека, то можете пройти диагностику методом ПЦР. Для этого необходимо обратиться в областной СПИД-центр, где исследование будет бесплатным. В частной лаборатории тестирование платное, но результаты будут готовы быстрее.

На забор крови нужно прийти с документами, удостоверяющими личность (паспорт, свидетельство о рождении и тому подобные).

Подготовка пациента

ПЦР-диагностика при ВИЧ не требует какой-либо специальной подготовки. Необходимо только прийти в лабораторию натощак, за два дня до забора материала ограничить физические нагрузки, отказаться от спиртных напитков и не курить за два часа до исследования.

За две недели до тестирования нужно прекратить приём медицинских препаратов, если же это невозможно, то следует предупредить о ситуации врача-лаборанта, который будет интерпретировать результаты ПЦР.

Взятие материала

Забор крови проводят из вены, расположенной в локтевой ямке, с помощью специальной вакуумной стерильной пробирки с иглой. Процедура состоит из следующих этапов:

• медицинская сестра обрабатывает кожу внутренней поверхности локтевого изгиба 96-процентным этанолом;
• на среднюю треть плеча накладывают жгут;
• иглу вводят в вену, и когда начинает поступать кровь, ослабляют жгут;
• для ПЦР набирают 3-5 мл крови;
• после забора материала к месту инъекции прикладывают ватный тампон, просят согнуть руку в локтевом суставе.

После процедуры пациенту присваивается номер, пробирка направляется в лабораторию для проведения ПЦР.

Расшифровка результатов

Интерпретация анализов ПЦР проводится непосредственно в лаборатории врачом лабораторной диагностики. Результат выдаётся лично пациенту при предъявлении документов, подтверждающих его личность.

Сколько времени делается анализ

Тестирование крови на ВИЧ с помощью полимеразной цепной реакции длится около шести часов. Результат в государственных лабораториях можно ждать от трёх дней до одной недели, а в частных лабораторных центрах – на 2-й…3-й дни после забора крови.

В некоторых лабораториях можно узнать расшифровку теста в день забора крови, но для этого необходимо доплатить за срочность.

Показатели качественного анализа

Результат качественного ПЦР позволяет определять присутствие или отсутствие в организме вируса иммунодефицита человека. Но оценить вирусную нагрузку с помощью этого теста нельзя. Поэтому качественный ПЦР подходит только для верификации диагноза ВИЧ, но не для мониторинга антиретровирусной терапии.

В заключении тестирования на ВИЧ качественным методом ПЦР можно увидеть три варианта результатов.

1. Отрицательный – РНК возбудителя не обнаружено.
2. Положительный – обнаружено геном ВИЧ.
3. Концентрация РНК ниже порога чувствительности тест-системы.

Количественное исследование

С помощью количественной полимеразной цепной реакции удаётся определить вирусную нагрузку, то есть концентрацию ВИЧ в крови больного. Показанием к проведению данного вида исследования являются:

• оценка тяжести патологического процесса в организме;
• мониторинг противовирусного лечения;
• определение эффективности терапии.

Результаты количественного ПЦР могут быть следующими:

• 0, то есть РНК вируса в крови пациента не выявлено;
• 10 тысяч копий на миллилитр – низкая вирусная нагрузка;
• 20 тысяч копий на миллилитр – показана антиретровирусная терапия;
• больше 100 тысяч копий на миллилитр – высокий уровень вирусной нагрузки.

Генотипирование

Метод генотипирования ПЦР определяет, каким именно типом ВИЧ произошло инфицирование. Вирус иммунодефицита первого и второго типов имеют схожую клиническую картину, но первый тип ВИЧ более агрессивен, быстро прогрессирует и вызывает осложнения.

Может ли результат быть ложноположительным

Как и любое другое исследование, анализ крови на ВИЧ методом ПЦР может давать ложноположительные результаты. Погрешность тестирования составляет 1-2 %, в зависимости от тест-системы. Специалисты это объясняют порогом чувствительности оборудования для проведения полимеразной цепной реакции.

Могут также определяться положительные ошибочные результаты ПЦР, вызванные нарушением техники забора крови, неправильностью проведения тестирования, загрязнением материала заражённой ВИЧ кровью и некачественными тест-системами.

Чтобы избежать лишних стрессов из-за ложноположительного ПЦР, нужно основательно подойти к выбору лаборатории для проведения тестирования – изучить отзывы о клинике, проверить сертификаты на исследование, удостовериться в квалификации медицинского персонала и так далее.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ

Чтобы результат ПЦР был максимально точным, тестирование проходят через 14 дней после возможного заражения, поскольку это время необходимо для увеличения концентрации вируса в организме до порога чувствительности тест-системы. Специалисты рекомендуют также пройти повторную диагностику через месяц после первого анализа. Если не соблюдать сроки, то можно получить ложноотрицательный результат.

Стоимость исследования

В государственном СПИД-центре можно сделать тест на ВИЧ бесплатно по ОМС, при условии наличия направления от врача поликлиники. При отсутствии направления от доктора за исследование придётся заплатить от 1000 до 2000 рублей.

В частных лабораторных центрах анализ ПЦР на инфицирование вирусом иммунодефицита человека проводится на платной основе, а именно:

• Гемотест – 2590 рублей (качественный);
• Инвитро – 12 570 рублей (комплексный);
• Центр молекулярной диагностики – 2800 рублей (качественный);
• Медси – 3600 рублей (качественный).